Microbiologie

voici comment on fait la culture des bactéries

 

 

 

voici comment on fait la culture des bactéries

Toutes bactéries, pathogènes ou non, peut se développer normalement en saprophyte sur un milieu nutritif convenablement choisi.

a-Préparation des milieux nutritifs

Le choix du milieu dépend évidemment des caractères particuliers de la Bactérie que l’on se propose d’étudier, d’où les inévitables tâtonnements qu’exige la culture d’une espèce qu’alors inconnue.
voici trois milieux de culture facile à préparer :

1-Milieux liquide : bouillon de viande peptoné et salé.

Faisons macérer, à la température du laboratoire, 500g de viande de Boeuf, préalablement dégraissée et haché, dans un litre d’eau distillée.Agitons de temps en temps, et au bout de 24h, exprimons dans une linge et reccueillons le liquide.
Portons le liquide à l’ébullition pendant 3 ou 4 min de façon à éliminer les albumines coagulable, puis filtrons sur un filtre plissé et mouillé à l’eau froide, afin de retenir les graisses.
Ajoutons,afin d’enrichir le milieu,20g de peptone et 10 g de Sel. Le liquide étant légèrement acide ,ajoutons quelques gouttes de lessive de soude jusqu’à virage au bleu d’un papier de tournesol rouge. Completons à 1000 cm3 avec avec de l’eau distillée.

2-Milieux gélosé(gélose nutritive)

Prenons 6g de gélose ,ou agar-agar, substance extraite d’une Algue de l’océan indien.
Debitons en menus fragments et laissons gonfler dans l’eau.Sur la gélose gonflée, versons 300 cm3 du bouillon de viande ci-dessous et chauffons en agitant pendant 10 min sans dépassé la température de 800 C.
Le Milieux étant redevenu acide, neutralisons comme précédemment et portons à l’autoclave à 1150 C pendant 45 min pour achever la dissolution de la gélose. Filtrons 1000 C( à l’ouverture de l’autoclave) sur papier très poreux

3-Milieu Solide

Decoupons dans une pomme de terre des prismes de 5×2×1,5 et sectionnons chacun d’eux en diagonale de façon à obtenir des surfaces inclinées facile à ensemencer.
La cuisson de l’amidon se fera en autoclave ( à 1200 C pendant 45 min) en même temps que la stérilisation.

b-Stérilisation des milieux et objets

La Stérilisation des objets —aiguilles,pipettes,pinces,ciseaux —peut être, soit par flambage( dans la flamme d’un bec Bunsen, ou dans une cuvette après arrosage d’alcool), soit par chauffage à 1700 C dans un stérilisateur à chaleur sèche( procédé préférable pour la verrerie).
La stérilisation des milieux est réalisée par action de la vapeur d’eau sous pression dans un autoclave.
Les Milieux sont tout d’abord répartis dans les récipients de Verre préalablement stérilisés.
—petits ballons à fond plat pour les milieux liquides,
—boîtes de Pétri et tubes simples pour les milieux gélosés
—tubes de Roux(avec étranglement) pour les milieux solides.
Ballons et tubes sont fermés à l’aide d’un bouchon de coton stérile.
La stérilisation en autoclave exige un chauffage à 1150C pendant 45 min pour les milieux liquides,gelosés ou non, et un chauffage à 1200C pendant 45 min pour les milieux solides et la verrerie.

c-Prélèvement,ensemencement et mise en etuve

On peut réaliser facilement des cultures sur boîtes de Pétri au moyen de Bactéries banales :
—en appliquant un doigt sale sur la gélose,
—en y étalant une goutte d’eau distillée dans laquelle on a dilué un peu d’eau naturelle, un peu de tartre dentaire,ect..,
—en enfermant une Mouche dans la boite durant quelques minutes.
Les boîtes étant mises à l’étuve à 370C pendant 2 ou 3 jours,chaque Bactéries engendre une colonie dont la forme, la dimension, la couleur, la consistance…sont caractèristique de l’espèce. Il suffit alors de prélever un fragment de l’une des colonies avec un fil métallique stérile et faire un repiquage sur gélose pour obtenir une culture pure.

d-Détermination des espèces bactériennes

La détermination des espèces se fait :
—par examen macroscopique des cultures
—par examen microscope des Bactéries
—par innoculation  à un animal (cas des bactéries pathogènes) et constatation des troubles provoqués.

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