COLORATION DIFFÉRENTIELLE DE GRAM

 

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COLORATION DIFFÉRENTIELLE DE GRAM

C’est la coloration de base en bactériologie qui permet de distinguer les bactéries en Gram positif et en Gram négatif, cette distinction est fondamentale pour leur identification.
En effet, le violet de gentiane se fixe sur des composants cytoplasmiques et après ce temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes. Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l’alcool (ou le mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram positif, la paroi constitue une barrière
imperméable à l’alcool et le cytoplasme demeure coloré en violet.

Protocole de coloration

Réactifs :
– Violet de gentiane phénique
– Lugol (iodo-iodure de potassium)
– Alcool à 95% (ou mélange alcool absolu+ 1/5ème d’acétone)
– Safranine (ou Fuchsine phéniquée de ziehl)

Mode opératoire

1. Réaliser un frottis et le fixer à la flamme;
2. Verser le Violet de Gentiane sur la lame ; laisser en contact 1 minute;
3. Jeter le colorant , laver à l’eau et finir de la chasser par la solution de Lugol ; laisser agir le Lugol environ 1 min;
4. Jeter le Lugol, laver à l’eau et faire couler de l’alcool sur la préparation ; rincer immédiatement à l’eau;
5. Recouvrir la préparation de Safranine, laisser agir environ 1 min.laver abondamment;
6. Sécher au dessus de la flamme d’un bec Bunsen.

Résultats

A l’issue de cette coloration,on peut distinguer :
– Des bactéries colorées en violet foncé ; elles ont gardé le violet, ‘le gram’ elle sont dites ‘Gram positif’ ;
– Des bactéries colorées en rose ou rouge pâle ; elles ont perdu le violet, ‘le Gram’ elles sont dites ‘gram négatif’.

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